ADAM 8，ADAM 15和MDC-L（ADAM 28）的淬灭荧光（FRET）底物，而ADAM 17没有。
编号: 121525
中文名称: FRET底物、FRET Substrates
CAS号: 1926163-42-9
单字母: H2N-E(Edans)-KPAKFFRL-K(Dabcyl)-NH2
三字母: H2N-Glu(Edans)-Lys-Pro-Ala-Lys-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(Dabcyl)-NH2
氨基酸个数: 10
分子式: C78H125N21O15S1
平均分子量: 1629.02
精确分子量: 1627.94
等电点(PI): -
pH=7.0时的净电荷数: 3.97
平均亲水性: 0.24285714285714
疏水性值: -0.34
来源: 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。
纯度: 95%、98%
盐体系: 可选TFA、HAc、HCl或其它
储存条件: 负80℃至负20℃
标签: 荧光共振能量转移肽(FRET) 酶底物肽 DABCYL标记肽 EDANS修饰肽
实验流程简述
以荧光物质CFP（供体）-YFP（受体）为例，检测AB蛋白在细胞内的相互作用。
- 细胞培养：根据实验培养特定的细胞用于转染，观察检测分子在细胞内的相互作用；
- 细胞转染：构建质粒载体CFP-A和YFP-B，将检测的AB蛋白分别偶联上荧光蛋白CFP和YFP，并将两个质粒共转染到培养的细胞内；
- 检测 FRET：质粒载体CFP-A和YFP-B转染细胞 10h、12h、18h、24h、36h、48h、72h 后检测，是否发生Fret；
- FRET图像采集： 确定 FRET 配对的激发波长， 蓝光被调谐分别用于探测最大和最小的供体和受体信号， 最大供体信号和最小受体信号对应的波长用于收集双表达细胞的 FRET信号。调整激光变化，以便获取最大 CFP 信号和最小 YFP 信号的激发光波长， 采集供体和受体图像，收集 FRET 信号。每个细胞 FRET 检测重复 3 次，每种转染至少完成 6 个细胞的 FRET 检测;
- FRET 数据处理： 去除 FRET 信号中 DSBT 和 ASBT 的光谱串色信号； 受体通路的FRET 信号需要对供体受体光谱灵敏度的变化进行矫正、对自发荧光和光学噪声进行矫正； 利用矫正系数对双标定细胞进行象素匹配矫正。
案例
最常见的一对标记组合是 Dancyl和Edans。
在本例中，荧光团 (EDANS) 和猝灭剂 (DABCYL) 与 HIV 蛋白酶的天然底物相连。在未裂解的底物中，DABCYL 淬灭 EDANS，因此没有可检测到的荧光。底物被 HIV-1 蛋白酶切割后，DABCYL 不再淬灭 EDANS，从而检测到 EDANS 荧光。然后可以监测 EDANS 荧光强度的变化以评估蛋白酶抑制剂的效率。
FRET 肽可用于研究肽酶特异性，因为它们可以连续监测反应，从而快速确定酶活性。供体/受体对之间的肽键可以被切割，从而产生荧光信号以测量纳摩尔浓度的酶活性。当未被切割时，FRET 肽会淬灭内部荧光；然而，供体/受体对之间肽键的断裂会释放出可以连续检测到的荧光信号，从而可以量化酶的活性。
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